作者：韩洁云,宛晓春,邓威威 | 茶树谷氨酸脱羧酶原核表达tlc实时荧光定量pcr
摘要：L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸（GABA）,此过程受谷氨酸脱羧酶（glutamic acid decarboxylase,GAD）催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列（GenBank登录号为KT728367.1）。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法（TLC）分析,经BAW（Butanol：Acetic acid：H_2O,4：1：2）和75%苯酚水溶液（Phenol：H_2O,3：1）2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。
《安徽农业大学学报（社会科学版）》是由安徽省教育厅主管、安徽农业大学主办的人文社会科学综合性学术双月刊。创刊于1992年。创刊之初为半年刊，1998年改为季刊，2002年改为双月刊。1994年取得正式刊号并面向国内外公开发行。本刊以传播最新的人文社会科学诸多领域的学术研究成果、促进学术交流和培养学术新人为己任。读者对象主要是从事“三农”问题、生态文明及其他人文社会科学研究的科研、管理及教学人员等。
《安徽农业大学学报（社会科学版）》以马列主义、毛泽东思想、邓小平理论、“三个代表”重要思想、科学发展观和习近平新时代中国特色社会主义思想为指导，坚持百家争鸣，大力促进人文社会科学各领域研究成果的交流。本刊坚奉实事求是的思想路线和理论联系实际的优良学风，重点关注农业、农村、农民问题及生态文明等方面的研究，为科教兴农、可持续发展两大战略的实施提供建言立说的平台，为社会主义精神文明和安徽地方经济、社会、文化及生态建设服务。
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